影響電泳加工度的要素

電泳加工

1、電滲效果

在支持物的電泳中，影響電泳的另一個(gè)重要要素是電滲效果。所謂電滲就是指在電場(chǎng)中液體對(duì)固體支持物的相對(duì)移動(dòng)，

例如在pH8.6時(shí)，血清蛋白質(zhì)進(jìn)行紙電泳時(shí)，γ球蛋白與其他蛋白質(zhì)相同帶負(fù)電荷，應(yīng)該向正極移動(dòng)，但是它卻向負(fù)極方向移動(dòng)，

這就是電滲效果的效果。濾紙的纖維間具有很多孔隙帶有負(fù)電荷，如一束毛細(xì)管，進(jìn)行電泳時(shí)蛋白質(zhì)通過(guò)這些孔隙向前移動(dòng)。

紙的孔隙帶有負(fù)電荷，與帶電顆粒相同能夠招引正離子，因而介質(zhì)沿管壁相對(duì)地帶的較多的正電荷。在電場(chǎng)中，

帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)向正極移動(dòng)，而介質(zhì)卻向反向陰極移動(dòng)，從而對(duì)蛋白質(zhì)顆粒的電泳加工起阻遏效果。

因?yàn)棣们虻鞍追肿宇w粒大，凈電荷較少，移動(dòng)速度慢，電滲效果大于顆粒向前電泳加工的力，效果γ球蛋白向撤退。

而其他血清蛋白質(zhì)，因分子較小，凈電荷較多，電滲效果小于分子向前移動(dòng)的力，

因而分子向前移。所以，血清蛋白質(zhì)電泳后球蛋白反而在點(diǎn)樣方位之后。

2、溶液的pH值

溶液的pH值挑選了帶電顆粒解離的程度，也挑選了物質(zhì)所帶凈電荷的多少，關(guān)于蛋白質(zhì)，氨基酸等兩性電解質(zhì)而言，

溶液pH值離電點(diǎn)越遠(yuǎn)，顆粒所帶凈電荷越多;電泳速度越快;反之則越慢。例如血清中幾種首要蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)各不相同，

白蛋白等電點(diǎn)是4.0。α2球蛋白等電點(diǎn)是5.06，β球蛋白等電點(diǎn)是5.1，γ球蛋白等電點(diǎn)是7.1。當(dāng)在pH8.6的電泳緩沖液中電泳時(shí)，

這些蛋白質(zhì)都帶負(fù)電荷，它們的電泳加工速度是白蛋白< α2球蛋白>β球蛋白>γ球蛋白。因而，當(dāng)要?jiǎng)e離一種蛋白質(zhì)混合物時(shí)，

應(yīng)挑選一種能擴(kuò)展各種蛋白質(zhì)所帶電荷量差異的pH值，以利于各種蛋白質(zhì)分子的解離。一起，為堅(jiān)持電泳過(guò)程中溶液pH穩(wěn)定也須運(yùn)用緩沖液。

3、溶液的離子強(qiáng)度

溶液的離子強(qiáng)度是另一個(gè)重要挑選的條件，在堅(jiān)持滿足緩沖能力前提下，離子強(qiáng)度要最小。溶液的離子強(qiáng)度越高，

帶電顆粒電泳加工速度越慢，反之越快。濃度大的緩沖液在合適電壓下，有較低的電阻和較大的電流，產(chǎn)熱較高。

假設(shè)這種額定的熱能夠遣散，高濃度的緩沖液松散常數(shù)較低，能夠產(chǎn)生較窄細(xì)的電泳區(qū)帶。

離子強(qiáng)度很高時(shí)要用低電壓，防止過(guò)多產(chǎn)熱，這樣又導(dǎo)致長(zhǎng)的電泳時(shí)間，致使增加變性和區(qū)帶別離困難。