影響電泳加工度的要素
1、電滲效果
在支持物的電泳中,影響電泳的另一個重要要素是電滲效果。所謂電滲就是指在電場中液體對固體支持物的相對移動,
例如在pH8.6時,血清蛋白質(zhì)進(jìn)行紙電泳時,γ球蛋白與其他蛋白質(zhì)相同帶負(fù)電荷,應(yīng)該向正極移動,但是它卻向負(fù)極方向移動,
這就是電滲效果的效果。濾紙的纖維間具有很多孔隙帶有負(fù)電荷,如一束毛細(xì)管,進(jìn)行電泳時蛋白質(zhì)通過這些孔隙向前移動。
紙的孔隙帶有負(fù)電荷,與帶電顆粒相同能夠招引正離子,因而介質(zhì)沿管壁相對地帶的較多的正電荷。在電場中,
帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)向正極移動,而介質(zhì)卻向反向陰極移動,從而對蛋白質(zhì)顆粒的電泳加工起阻遏效果。
因為γ球蛋白分子顆粒大,凈電荷較少,移動速度慢,電滲效果大于顆粒向前電泳加工的力,效果γ球蛋白向撤退。
而其他血清蛋白質(zhì),因分子較小,凈電荷較多,電滲效果小于分子向前移動的力,
因而分子向前移。所以,血清蛋白質(zhì)電泳后球蛋白反而在點樣方位之后。
2、溶液的pH值
溶液的pH值挑選了帶電顆粒解離的程度,也挑選了物質(zhì)所帶凈電荷的多少,關(guān)于蛋白質(zhì),氨基酸等兩性電解質(zhì)而言,
溶液pH值離電點越遠(yuǎn),顆粒所帶凈電荷越多;電泳速度越快;反之則越慢。例如血清中幾種首要蛋白質(zhì)的等電點各不相同,
白蛋白等電點是4.0。α2球蛋白等電點是5.06,β球蛋白等電點是5.1,γ球蛋白等電點是7.1。當(dāng)在pH8.6的電泳緩沖液中電泳時,
這些蛋白質(zhì)都帶負(fù)電荷,它們的電泳加工速度是白蛋白< α2球蛋白>β球蛋白>γ球蛋白。因而,當(dāng)要別離一種蛋白質(zhì)混合物時,
應(yīng)挑選一種能擴展各種蛋白質(zhì)所帶電荷量差異的pH值,以利于各種蛋白質(zhì)分子的解離。一起,為堅持電泳過程中溶液pH穩(wěn)定也須運用緩沖液。
3、溶液的離子強度
溶液的離子強度是另一個重要挑選的條件,在堅持滿足緩沖能力前提下,離子強度要最小。溶液的離子強度越高,
帶電顆粒電泳加工速度越慢,反之越快。濃度大的緩沖液在合適電壓下,有較低的電阻和較大的電流,產(chǎn)熱較高。
假設(shè)這種額定的熱能夠遣散,高濃度的緩沖液松散常數(shù)較低,能夠產(chǎn)生較窄細(xì)的電泳區(qū)帶。
離子強度很高時要用低電壓,防止過多產(chǎn)熱,這樣又導(dǎo)致長的電泳時間,致使增加變性和區(qū)帶別離困難。